КЛД микс, арт. KLDS, 50 мкл (50 реакций). Производитель Клонинг Фасилити (Россия)

Описание

КЛД микс (KLD mix) от Клонинг Фасилити – смесь ферментов киназы, лигазы и рестриктазы DpnI в оптимизированном буфере для обработки ПЦР-продуктов после сайт-направленного мутагенеза.  

КЛД Микс для одностадийного лигирования ПЦР-продуктов, применяется для получения замен, делеций и инсерций в плазмидной ДНК.

• Быстро и удобно. Реакция проводится без дополнительной очистки ПЦР-продукта
• Не требуются фосфорилированные праймеры
• Подходит для сайт-направленного мутагенеза

После амплификации целевого фрагмента ДНК смесь ферментов обеспечивает фосфорилирование концов ДНК, лигирование ПЦР-продукта и удаление исходной метилированной матрицы в одной реакционной смеси. Набор предназначен для работы с линейными двуцепочечными ПЦР-продуктами, полученными при амплификации плазмидной ДНК высокоточной ДНК-полимеразой.

Рекомендуем использовать минимальное количество матричной ДНК в ПЦР (стандартно - 1 нг на 50 мкл реакцию). Рекомендуем не превышать объем ПЦР-продукта для КЛД реакции (стандартно - 1 мкл ПЦР продукта на 10 мкл реакции). Увеличение количества ПЦР-продукта может привести к снижению эффективности трансформации. Если количество целевого ПЦР-продукта низкое, можно увеличить его количество в реакции КЛД (не более 5 мкл на 10 мкл реакцию), однако, в этом случае необходима предварительная очистка ПЦР-продукта. Используйте высокоточную полимеразу и убедиться в отсутствии неспецифической амплификации в ПЦР-продукте. КЛД Микс обеспечивает фосфорилирование 5’-концов ПЦР-продукта, лигирование фрагмента в кольцевую форму и деградацию исходной ДНК-матрицы рестриктазой DpnI. Проведите ПЦР с мутантными праймерами (вставки/замены/делеции), а затем используйте микс для лигирования и удаления исходной матрицы. При дизайне праймеров точечные замены располагайте внутри, вставки — на 5'-конце, а для делеций фланкируйте удаляемый участок. Следите за отсутствием вторичных структур и подбирайте близкие температуры отжига. Очистка ПЦР-продукта до или после инкубации с КЛД Миксом не требуется. Стандартное время реакции — 30 минут. Инкубацию можно продлить до 2 часов, однако обычно это не приводит к существенному увеличению эффективности.Для большинства ПЦР-продуктов достаточно 1 мкл. Оптимизация объема может потребоваться только для длинных фрагментов (>10 кб) или при очень низком выходе ПЦР. Не используйте для трансформации более 5 мкл реакционной смеси. Если необходимо взять больший объем, предварительно проведите ферментативную очистку.

Объем: 50 мкл (50 реакций). Под одной реакцией подразумевается 1 мкл КЛД Микса, 1 мкл 10х реакционного буфера, а также ДНК и воды в конечном объеме 10 мкл.

Срок годности 2 года. Ферменты и реакционный буфер хранить при температуре -20°C. Для реакционного буфера рекомендуется сделать аликвоты для однократного использования.

Клонинг Фасилити – российская биотехнологическая компания с R&D и производством в Москве (ИБХ РАН). Специализируется на:

• Нанопоровом секвенировании плазмид целиком
• Сборке генетических конструкций, наработке плазмид 
• Синтезе ДНК
• Разработке и производстве ферментов для ДНК и белков

Почта: orders@cloning.tech
Сайт: cloning.tech

Общие характеристики