TEV-протеаза (TEVp)

Описание

Настоящий продукт является рекомбинантной версией каталитического домена белка ядерного включения вируса гравировки табака (Tobacco Etch Virus). Фермент содержит на N-конце гистидиновую метку и имеет молекулярную массу 28,5 кДа. TEV-протеаза расщепляет белки по специфическому сайту из семи аминокислотных остатков следующего состава: Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-GluХ (E-N-L-Y-F-Q-Х). При этом седьмым аминокислотным остатком может быть один из шести: серин (S), глицин (G), аланин (A), метионин (M), цистеин (C) или гиститдин (H) [1]. Расщепление происходит между Глутаминовым и Х аминокислотными остатками (Gln-Х).

TEV-протеаза инактивируется прогреванием при 65°C в течение 10-15 минут. Так же, фермент ингибируется присутствием в реакционной смеси 40% глицерина, 5 мМ Zn2+, 1 мМ Cu2+ и 10 мМ Co2+, 200 мM NaCl, 2 М мочевины, 500 мМ гуанидин гидрохлорида, 50 мМ имидазола.

TEV-протеаза сохраняет активность:
● в присутствии 10 мМ MgSO4, MnCl2 и CaCl2, 100 мМ ЭДТА;
● в присутствии ингибиторов протеаз, таких как апротинин, бензамидин, пепстатин, фенилметилсульфонил фторид;
● при рН 6,0 – 9,0;
● температуре от 4°С до 37°С. 

Область применения:
TEV-протеаза может применяться для расщепления слитых рекомбинантных полипептидов, имеющих сайт узнавания протеазы между лидерным фрагментом и целевым белком. Наличие гистидиновой метки у TEV-протеазы позволяет очищать целевой белок от фермента с помощью металл-хелатной аффинной хроматографии.

Единицы активности:
Одна единица активности соответствует количеству фермента, необходимому для расщепления 2 мкг химерного рекомбинантного белка (~145 кДа, MBP-Bst) до глубины гидролиза 90% в общем реакционном объеме 10 мкл за 1 час при 30°C в стандартном реакционном буфере.
Состав стандартного реакционного буфера: 50 мМ Tris-HCl (pH 7,5 при 25°C), 0,5 мМ EDTA и 1 мМ DTT (1мл 10х буфера поставляется вместе с ферментом).

Фасовка: 1000 мкл
Концентрация: 5000 е.а./мл.

Общие характеристики