Каталог
Фильтры
фильтр
ДНК модифицирующий фермент Taq ДНК-лигаза (40 000 е.а./мл, 2 000 е.а.), арт. M0208 S, New England Biolabs
T4 ДНК-лигаза (Rapid), 600 000 е.а., арт. N103-01, Vazyme Biotech Co., Ltd
ДНК модифицирующий фермент T4 ДНК-лигаза (400 000 е.а./мл, 20 000 е.а.), арт. M0202 S, New England Biolabs
Фермент ДНК лигаза: роль и применение в молекулярной биологии
Что такое ДНК лигаза и её функции
ДНК лигаза – это уникальный фермент, играющий критическую роль в процессах репарации и репликации ДНК. Основные функции ДНК лигазы заключаются в соединении двухцепочечных молекул ДНК путем формирования прочной phosphodiester bond между 3'-гидроксильной группой и 5'-фосфатной группой фрагментов ДНК. Фермент используется широко в генетической инженерии и молекулярной биологии, где необходима точная и надежная сборка фрагментов двухцепочечной ДНК.
Особенности строения DNA ligases и механизм действия
DNA ligases are ферменты, которые состоят из нескольких структурных доменов, включая the enzyme active site. Важнейшим компонентом является active site lysine, который участвует в каталитическом механизме лигазной реакции. Согласно исследованиям Ferrer et al, формирование phosphodiester bond проходит в два этапа. В the first step фермент присоединяет АМФ к активному центру, а во втором - переносит его на nick в цепи ДНК.
Типы DNA ligases и их значение
DNA ligases классифицируются на несколько типов, включая mammalian DNA ligases и thermostable DNA ligases. Ферменты mammalian DNA ligases, такие как ligases IIIα and ligases I and IV, необходимы в репарации повреждений ДНК и ее репликации. Они поддерживают стабильность генома и участвуют в важных клеточных процессах, таких как восстановление double stranded DNA после повреждений и разрывов.
Практическое использование ДНК лигазы
DNA ligase широко применяется в молекулярной биологии и генной инженерии. Фермент используется в различных методиках, таких как ligase based chain reaction (лигазной цепной реакции), cloning in vitro, радиомаркировке и других процессах манипуляции с ДНК или РНК. Применение ДНК лигазы является неотъемлемым этапом создания рекомбинантных молекул ДНК, а также при вставке фрагментов ДНК в векторные конструкции.
Особенности лигазной реакции и условия ее проведения
Успешное проведение лигазной реакции зависит от состава реакционной смеси, в которой обязательными компонентами являются буфер, кофакторы и сами фрагменты ДНК. Точность соединения фрагментов двухцепочечной ДНК в реакционной смеси определяется строгим соблюдением температурных режимов и концентраций компонентов.
Исследования фермента DNA ligase
Роль и значение фермента DNA ligase активно исследуются в научных публикациях. Например, работы Ferrer et al демонстрируют особенности функционирования mammalian DNA ligases и the Tth DNA ligase. Показано, что the ligase enzyme способна эффективно соединять blunt ends и sticky ends фрагментов ДНК в duplex DNA. Данные исследования подчеркивают важность активного центра (the active site) в молекулах ферментов, что позволяет им эффективно действовать in vitro и in duplex DNA.
DNA ligases в методах генетической инженерии
DNA ligases are незаменимы в области генетической инженерии. Ферменты активно применяются для создания рекомбинантных молекул ДНК и в различных методиках, таких как репликация и репарация ДНК, клонирование фрагментов нуклеиновых кислот, введение радиоактивной метки и в методиках обратной транскрипции. Особое место DNA ligase занимает в методиках ligase based detection of генетических мутаций.
Заключение: значимость фермента ДНК лигаза
Таким образом, ДНК лигаза лигаза является ключевым ферментом, обеспечивающим структурную целостность и функциональность генома. Использование фермента позволяет эффективно проводить манипуляции с молекулами нуклеиновых кислот и получать достоверные результаты в молекулярных исследованиях. Современные DNA ligases обеспечивают высокую точность, эффективность и надежность всех манипуляций с ДНК и РНК в лабораторной практике.